上海橋星生物

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上海橋星生物提供的分子生物學(xué)試劑和試劑盒、美國聯(lián)合碳化和美國光譜醫(yī)學(xué)透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細(xì)胞因子和細(xì)胞分離液、抗體和Elisa試劑盒及常用生物試劑等，Sigma、Amresco等各*大量現(xiàn)貨火爆*，歡迎登錄m.zhongdayuke.com或、

Qiagen是世界各地研究人員*的的核酸純化品牌之一。良好的口碑、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，每年40％的強(qiáng)勁增長支持Qiagen*的科研力量專注于核酸純化技術(shù)的不斷改革和創(chuàng)新，使得Qiagen的產(chǎn)品系列廣泛而全面，更成為眾多小品牌模仿和學(xué)習(xí)的目標(biāo)。就如IBM筆記本電腦一樣，Qiagen奉行優(yōu)價的政策，再加上關(guān)稅運(yùn)費等因素，使得Qiagen在國內(nèi)市場中成為“產(chǎn)品”的代名詞。常有實驗室的人說，如果是一般實驗就用國產(chǎn)的，如果是重要實驗就用Qiagen的。誠實的說，質(zhì)量和價格一向都是成正比的，所以這樣一個*品牌到底在哪里還是值得我們?nèi)チ私獾摹?/p>

    就質(zhì)粒純化領(lǐng)域來說，作為用戶，提質(zhì)粒關(guān)心的不外乎這幾個因素：
1． 獲得產(chǎn)物的純度，因為所得質(zhì)粒純度和下游應(yīng)用密切相關(guān)。
2． 產(chǎn)量/得率，根據(jù)個人需要獲得產(chǎn)物的量來選擇不同的純化量。
3． 速度和使用的方便程度，穩(wěn)定性。使用試劑盒無非是為了快速方便和穩(wěn)定。
4． 經(jīng)濟(jì)性

  Qiagen的質(zhì)粒純化產(chǎn)品線充分照顧了4種不同純度級別的需要（向下兼容）：
1． 轉(zhuǎn)染級――這種zui高純度的去內(nèi)毒素的質(zhì)粒純化，適用于基因治療、細(xì)胞顯微注射、DNA疫苗、基因沉默(RNAi)等要求嚴(yán)格的操作，以及轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞、敏感細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等對內(nèi)毒素特別敏感的細(xì)胞株。
2． 常規(guī)轉(zhuǎn)染級――這種純度優(yōu)于2次CsCl超速離心純化的質(zhì)粒，適用于多數(shù)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實驗、特殊的修飾反應(yīng)、BAC或者cosmid建庫等實驗
3． 分子生物學(xué)級――這種純度相當(dāng)于1次CsCl超速離心純化的質(zhì)粒，適用于常規(guī)的建庫和克隆實驗、部分細(xì)胞轉(zhuǎn)染、體外轉(zhuǎn)錄和體外翻譯實驗
4． 測序級――的初級純化標(biāo)準(zhǔn)更適合于常規(guī)酶切連接反應(yīng)、高通量測序、PCR、探針合成、轉(zhuǎn)化等常規(guī)實驗

    就純化規(guī)模來說Qiagen的產(chǎn)品簡單可分為Mini(20ug), Midi(100ug-200ug)，Maxi(500ug-750ug)，Mega(2.5mg)，Giga(10mg)，甚至更高的100mg大規(guī)模純化。此外Qiagen還提供包括96孔板、8條管等高通量Mini純化試劑盒。作為看家產(chǎn)品之一，Qiagen的質(zhì)粒純化產(chǎn)品得率是很高而且也很穩(wěn)定的，一向都是質(zhì)量的保證，不然也不會得到大家的一致認(rèn)可。曾經(jīng)某人很驕傲地告訴生物通：基本上，投訴Qiagen產(chǎn)品的zui終發(fā)現(xiàn)都是用戶自己的使用問題。Qiagen對自己的產(chǎn)品極為自信--zui嚴(yán)格的質(zhì)量控制，加上科研人員的一致認(rèn)可，你做不出來多半是自己的問題。當(dāng)然Qiagen也在不斷改進(jìn)說明書，甚至考慮提供中文版以減少誤會的發(fā)生。

    除了質(zhì)量的穩(wěn)定可靠之外，Qiagen的產(chǎn)品設(shè)計非常人性化，不斷改進(jìn)以便充分滿足了越來越高的要求--更快，更方便。比如需要大量純化超純質(zhì)粒時，經(jīng)過溶液1，2，3處理后需要大容量高速離心機(jī)離心沉淀。Qiafilter的推出可以經(jīng)過抽濾漏斗的形式快速抽濾，避免這一次較長時間的離心，而且過濾得更干凈--連偶爾出現(xiàn)懸浮在離心上清的細(xì)胞膜沉淀也可以*去除，令后面的純化更有效率。另外離心或者抽濾得到的上清都需要經(jīng)過Qiagen重力離子交換柱，在低鹽和重力的作用下溶液流過交換樹脂，復(fù)性的質(zhì)粒不斷被樹脂吸附，雜質(zhì)隨溶液流出。的純化樹脂可以在不用酚氯仿等有機(jī)試劑的條件下極的純化質(zhì)粒，但是制備質(zhì)粒的規(guī)模越大，溶液越多，上柱的時間也越長。zui后用高鹽洗脫的質(zhì)粒還需要經(jīng)過異丙醇沉淀。為解決時間太長的問題，Qiagen推出了HiSpeed系列，離心或者抽濾得到的上清通過一個針管過濾器，質(zhì)粒就可以地吸附在過濾器里的純化介質(zhì)上，zui后很方便的洗脫。只需要20分鐘－半小時就可以完成原來需要2個多小時的過柱工作，而且不再需要大容量高速冷凍離心機(jī)了。對于沒有大離心機(jī)的實驗室真是很方便的。對于一些需要做BAC，粘粒等超大質(zhì)粒純化的用戶來說，基因組片斷的污染和難以區(qū)分是一件煩人的事--Large Construct Kit就可以借助ATP依賴的DNA酶來消化線性的DNA而保留環(huán)狀質(zhì)粒，*去除基因組片斷的污染。

    Qiagen的產(chǎn)品設(shè)計的細(xì)心和嚴(yán)謹(jǐn)可靠確實值得稱道。特別是對于有特殊高要求的用戶來說，Qiagen的質(zhì)量是對得起這個價格的，每年兩次的*活動也算不錯的入貨機(jī)會。我們在這里簡單介紹一下Qiagen質(zhì)粒純化產(chǎn)品

1 轉(zhuǎn)染級

    當(dāng)你提取DNA是為了轉(zhuǎn)染原代、敏感或者懸浮的細(xì)胞；進(jìn)行基因沉默研究、細(xì)胞注射顯微操作；進(jìn)行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴(yán)格的實驗，就應(yīng)該考慮選擇以上兩種試劑盒。EndoFree系列是為了除去細(xì)菌中的內(nèi)毒素而專門設(shè)計的。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上*的成分，它主要成分是脂多糖中的類脂A。它在細(xì)菌被裂解時被釋放出來，它的存在會極大程度地影響轉(zhuǎn)染效率。同時內(nèi)毒素可以激活免疫細(xì)胞的非特異反應(yīng)，造成實驗中的假陽性。

    EndoFree系列設(shè)計有特殊的Endotoxin removal buffer有效去除內(nèi)毒素，使用此試劑盒提取的DNA內(nèi)毒素含量小于0.1 EU/μg；同時引用了Qiagen*的QIAfilter的超純過濾技術(shù)，使得到的DNA純度相當(dāng)于兩次氯化銫超速離心分離純化，而避免了常時間超離。試劑盒操作方便、快捷、結(jié)果穩(wěn)定可靠；可以分別選取500ug、2.5mg、10mg的不同純化量。當(dāng)提取低拷貝質(zhì)粒時建議使用meg*試劑盒而不是gig*，原因是在過濾大量的細(xì)菌培養(yǎng)液時QIAfilter的過濾容量有限。
當(dāng)你所需DNA用量十分巨大時，比如說DNA疫苗免疫動物，可以考慮使用Qiagen公司專門為純化核酸設(shè)計的采用了陰離子交換技術(shù)的Ultrapure 100 column。

    提取超純DNA時無需使用常規(guī)提取中有毒的化學(xué)試劑，如苯酚、氯仿、溴化乙啶、氯化銫等，將有害物質(zhì)減小到zui少，從而更好的保護(hù)實驗操作人員的自身安全。

2 常規(guī)轉(zhuǎn)染級 

    當(dāng)你進(jìn)行普通轉(zhuǎn)染、構(gòu)建文庫、對DNA進(jìn)行修飾時可以考慮以上幾種試劑盒。當(dāng)你用量較小時，可以考慮Plasmid Mini Kit和QIAwell 96 Ultra系列，其中QIAwell 96 Ultra系列采用8孔條或96孔板進(jìn)行提取，可以利用機(jī)器人工作臺進(jìn)行機(jī)械提取，重復(fù)性較好。用量較大時可以選用HiSpeed Plasmid和QIAGEN Plasmid/QIAfilter/Large Construct系列。Large Construct系列是專門為了大型質(zhì)粒設(shè)計的，它采用*的ATP依賴核酸內(nèi)切酶有選擇地消化了細(xì)菌的基因組DNA，使結(jié)果更加可靠。除了這種專門為大型DNA設(shè)計的試劑盒外，還有QIAwell 96 Ultra、HiSpeed Plasmid和QIAfilter系列也可以提取大至50kb的質(zhì)粒。

    如果你有許多質(zhì)粒要提取，那么可以采用QIAfilter系列以節(jié)省你的時間。此系列采用陰離子交換柱進(jìn)行純化。中性的細(xì)菌裂解液直接裝入QIAfilter Cartridge中，在數(shù)秒內(nèi)過濾除去雜質(zhì)，將濾液裝入到陰離子交換裝置中，在低鹽、合適的pH值下質(zhì)粒被選擇性的結(jié)合上去。利用中等鹽濃度的洗液去除RNA、蛋白、代謝物及其它低分子量雜質(zhì)。用高鹽溶液將DNA洗脫，洗脫液用異丙醇沉淀，離心收集產(chǎn)物。

    如果你不需要很高的產(chǎn)率只是要求進(jìn)一步提高速度，那么HiSpeed Plasmid系列將*。它的改進(jìn)之處是在QIAfilter系列基礎(chǔ)上，將過柱和離心操作改為用注射器收集產(chǎn)物，這樣大大加快了提取的速度，將整個提取過程縮短到45或65分鐘。HiSpeed Midi系列純化載量是200ug，比原來的100ug大一倍，而HiSpeed Maxi的載量更高達(dá)750ug，比常規(guī)Maxi能純化更多的質(zhì)粒。

3.分子生物學(xué)級

    相信在大多時候，你提取質(zhì)粒就是進(jìn)行分子生物學(xué)操作，如體外轉(zhuǎn)錄/翻譯，PCR，酶切等。在這個級別有兩個系列以供選擇。這兩個系列都可以提取大至50kb的質(zhì)粒。QIAprep Spin則是采用應(yīng)用zui廣泛的硅膠膜技術(shù)，用高鹽溶液離心過柱使DNA吸附，用低鹽溶液離心洗脫。得到的質(zhì)粒相當(dāng)于一次CsCl超速離心純化得到的純度，適合轉(zhuǎn)染生命力較強(qiáng)的細(xì)胞，體外轉(zhuǎn)錄/翻譯，長程測序，當(dāng)然也包括常規(guī)的酶切，PCR等等。實際上這個純度非常高，一些常用細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染也可以勝任；而酶切連接PCR這些實驗只需要載測序級純度的質(zhì)粒就足夠了，用不著這么高純度。國產(chǎn)許多品牌都主戰(zhàn)于這個范圍，普通產(chǎn)品也能夠滿足一般酶切PCR等反應(yīng)需要，因而個人以為這里Qiagen實在沒有什么優(yōu)勢。生物通會在隨后介紹更為經(jīng)濟(jì)實惠的國產(chǎn)篇。

    TurboFilter96孔板設(shè)計有非均勻的過濾裝置，在高鹽溶液下TurboFilter96孔板直接真空過濾細(xì)菌裂解液。除去大顆粒的濾液再經(jīng)轉(zhuǎn)染生命力較強(qiáng)的細(xì)胞，體外轉(zhuǎn)錄/翻譯，長程測序過QIAprep 96孔板進(jìn)行下一步的純化。此法需時少，而且重復(fù)性好。

4.測序級

    在人類基因組項目完成后，相繼有許多其它物種的基因組全序列被測出，這些都離不開測序技術(shù)的改進(jìn)。以上三個系列都是為了高通量測序而設(shè)計的，它們在提取時都十分快捷、方便。DirectPrep 96 和MagAttract 96系列可以提取大至50kb的質(zhì)粒，其中DirectPrep 96系列設(shè)計的裂解方式省略了清除裂解液這個步驟；而MagAttract 96系列采用的是磁珠技術(shù)，降低了試劑盒的成本。R.E.A.L. Prep 96系列采用的是快速堿裂解系統(tǒng)，除了一般的質(zhì)粒，還可以提取cosmids, BACs, PACs, 和P1s等大型的載體。不過這個級別Qiagen沒有提供手工提取的試劑盒。其實我們不就要又便宜又快的東西嘛。

    Qiagen公司質(zhì)粒提取試劑盒產(chǎn)品可以說是十分齊全的，相信無論你有什么樣的需求都可以找到一款適合自己的產(chǎn)品。